掌握微生物膜正确使用方法是确保数据可靠的核心

更新时间：2025-10-22

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　　微生物膜是一种高度敏感的生物传感材料或过滤介质，广泛应用于微生物检测、膜生物反应器（MBR）、细胞培养及生物传感器中。它不仅能够截留微生物，还能为微生物群落提供附着生长的微环境，实现对生物活性的精准调控。掌握微生物膜的正确使用方法，是确保实验成功、数据可靠与系统稳定的核心。

　　第一步：使用前准备与环境确认

　　在洁净、无菌的环境下操作，避免外源微生物污染。检查微生物膜包装是否完好，确认在有效期内。根据用途选择合适类型：

　　检测用膜：如0.45μm或0.22μm孔径的醋酸纤维素（CA）或聚醚砜（PES）滤膜，用于水样中细菌的富集。

　　生物载体膜：如聚氨酯泡沫、陶瓷膜或改性纤维膜，用于生物膜反应器中微生物的固定化。

　　确保操作台、镊子、培养皿等器具已灭菌（高压蒸汽或紫外线照射）。

　　第二步：膜的取出与装载

　　佩戴无菌手套，用无菌镊子从包装中取出膜片，严禁手指直接接触膜面。对于过滤应用，将膜小心放置于无菌过滤漏斗或滤器支撑网上，确保膜与密封圈贴合，无褶皱或气泡。对于生物反应器，按设计要求将载体膜装入反应槽或模块中。

　　第三步：样品处理与过滤（适用于检测膜）

　　将待测水样或溶液通过真空或加压方式抽滤。控制流速适中，避免过高压力导致膜破裂或微生物损伤。过滤完成后，用少量无菌缓冲液冲洗滤器内壁，确保微生物全部截留在膜表面。

　　第四步：转移与培养

　　过滤后，用无菌镊子将膜轻轻转移到预置的固体培养基（如营养琼脂、m-Endoagar）上，膜与培养基接触。对于倒置培养法，确保膜面朝上，防止滑动。盖好培养皿，标记样品信息。

　　第五步：培养条件控制

　　将培养皿放入恒温培养箱，按目标微生物要求设定温度与时间：

　　总大肠菌群：37±1℃，24小时。

　　粪大肠菌群：44.5±0.2℃，24小时。

　　保持湿度，防止培养基干裂。避免阳光直射，防止非目标菌生长。

　　第六步：结果观察与计数

　　培养结束后，观察膜表面菌落形态、颜色与数量。典型菌落（如金属光泽、红色中心）可初步判定。使用菌落计数器进行精确计数，结果以CFU/100mL表示。

　　第七步：生物膜反应器中的活化与运行（适用于载体膜）

　　新装载体膜需进行“挂膜”启动：注入富含营养的污水与接种污泥，在低负荷下连续曝气7-14天，使微生物在膜表面形成稳定生物膜。运行期间控制溶解氧、pH、温度与水力停留时间，维持生物活性。

　　第八步：使用后处理

　　一次性检测膜使用后应高压灭菌（121℃,30分钟）后按医疗废物处理。可重复使用的载体膜需清洗（反冲洗或化学清洗），去除老化生物膜与污垢，恢复通量。