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试剂盒各项实验时的条件选择介绍

更新时间:2023-02-10      浏览次数:382
  Elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗体ELISA检测。
 
  试剂盒的使用原理似乎很简单,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,间中夹杂着洗涤和封闭。然而,即使是平淡无奇的洗涤和封闭,如果做得不太好,也有可能毁了整个实验。在实验结束时,我们是否能获得有意义的信息,这在很大程度上取决于结果的信噪比,背景噪音会影响您对结果的判断。
 
  试剂盒进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
 
  1、包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
 
  2、固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
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