一文读懂：凝胶滤膜的正确使用方法与避坑技巧

更新时间：2026-07-20

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　　凝胶滤膜是一种常用于蛋白质纯化、分子筛分及缓冲液置换的层析介质，其多孔网状结构可依据分子大小实现选择性分离。在生物化学和制药实验中，正确使用凝胶滤膜对保障分离效果和样品回收率至关重要。掌握凝胶滤膜正确使用方法，有助于提升实验重复性并避免介质堵塞或性能下降。

　　1、预处理与溶胀

　　干粉状凝胶滤膜使用前需充分溶胀。将所需量的干胶加入适量去离子水或起始缓冲液中，室温静置数小时至膨胀(具体时间参考产品说明书)。部分凝胶需加热煮沸加速溶胀，但应避免剧烈搅拌以防颗粒破碎。溶胀后用缓冲液反复沉降洗涤，去除细小颗粒和保存液。

　　2、装柱操作

　　选择合适尺寸的层析柱，确保柱床高度与分离需求匹配。关闭柱底出口，加入少量缓冲液润湿柱内壁，再缓慢匀速倒入凝胶浆液，同时打开出口使凝胶自然沉降形成均匀柱床。避免产生气泡或断层，必要时可轻敲柱壁排气。装填完成后用起始缓冲液平衡至少2–3倍柱体积。

　　3、上样与洗脱

　　样品体积一般不超过柱床体积的1%–5%，以减少区带扩散。用移液器沿柱壁缓慢加样，避免扰动凝胶表面。随后连接缓冲液储液瓶，以恒定流速进行洗脱。可通过分部收集器按时间或体积收集流出液，并结合检测器(如UV)监测目标组分。

　　4、清洗与再生

　　每次使用后，先用高盐缓冲液(如0.5MNaCl)冲洗去除吸附杂质，再用起始缓冲液平衡。若长期不用，可保存于20%乙醇或厂商推荐的防腐液中，4℃避光存放。定期检查凝胶是否出现压缩、开裂或流速异常，必要时更换新介质。

　　5、注意事项

　　避免样品中含有颗粒物或高黏度成分，上样前应离心或过滤。操作全程保持流速稳定，防止压力骤变导致柱床塌陷。不同型号凝胶滤膜的分离范围各异，应根据目标分子量合理选择。